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一、无菌准备:

1、提前1个小时打开无菌室紫外灯消毒灭菌
1、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒;
2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌;
3、所有无菌操作都需在酒精灯旁操作。

二、培养基配置:

1、LB肉汤:肉汤粉330g、5g葡萄糖、1000ml蒸馏水; .

2、营养琼脂培养基:琼脂培养基粉300g、5g葡萄糖、1000ml蒸馏水。

三、倒平板操作:

1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰;
2、用左手将培养皿打开-条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥

形瓶中的培养基(约10~20ml)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，轻轻摇匀。

3、等待平板冷却凝固(大约需5~10min) 后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。

四、平板划线操作:

1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红;

2、在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞;

3、将试管口通过火焰;将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液;将试管口通过火焰，并塞上棉塞;

4、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。

5、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始 往第二区域内划线。重复以上操作，在三区域内划线。注意不要将最后一区域的划线与第一区相连。

6、将平板倒置，放入培养箱中培养。

五、稀释操作:

1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按10~10的6次方(打不出六次方来)的顺序编号。
2、用移液管吸取1ml培养的菌液，注入10倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。

3、从

10

倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入

10

2

倍稀释的试管中，重复第2步的混匀操作。

依次类

推，直达完成最后一支试管的稀释。注:移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰的1~2cm处。

五、涂布平板操作:

1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中;
2、取少量菌液(不超过0.1ml)，滴加到培养基表面;
3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s;
4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。

注意事项:

1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
2、操作中一定要注意防火!不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

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食品实验室服务

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在深圳北大医院做一次IUI人工受孕大概需要5000-15000元不等，具体多少还是要因人而异。因为其实做一次IUI夫精宫腔内人授手术费并不贵，大概1200元，但前期检查以及促排治疗花费就比较多一些了，检查费大概在2000-3000元不等，促排根据女方实际情况来看，有的只需卵泡监测，有的需促排治疗，这部分费用在500-9000元不等，若是男方取精困难，还需手术取精，费用也差不多在1000左右。

深圳北大医院目前已经开展宫腔内人工授精（IUI）技术多年，其技术成熟，同时该院男科还开展了显微睾丸取精术以及各种精液检查项目。而这些都与人工受孕费用相关，这里就为各位介绍一下北大深圳医院做一次IUI人工受孕所需的费用情况：

1.前期检查费：做夫精人工授精之前，男女双方都要进行相关的检查，看是否符合人工授精适应症，以及便于医生制定合适的治疗方案，检查项目有精液常规检查、精子顶体酶活性定量检测、精子膜表面抗体、精浆生化定量检测、精子核完整性检测（DNA）、输卵管、AMH等等，一般费用是在2000元-3000元左右；

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2.卵泡监测/促排费：如女性月经正常就只需要到医院监测卵泡发育情况，如果月经不规律或者内分泌水平紊乱者可行促排卵治疗，同时也需要进行卵泡监测，这部分费用差异主要在于促排用药，因用药种类、剂量不同，而有较大的差异，通常促排费在5000-9000元左右，只监测卵泡的话，费用在500块左右；

3.取精/精液处理费：是否进行取精手术，看男性患者的实际情况，取精手术费通常是1000多，精液处理费在800元左右；

4.IUI人授手术费：男方的精液经体外洗涤达标以及女方检测血清促黄体生成素峰值后一天就可以进行宫腔内夫精人工授精手术，手术费用在1200元左右。

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